天津本生|PCR八聯(lián)管試劑盒的清洗方法及注意事項(xiàng)

　　實(shí)驗(yàn)方法原理：硅膠膜在高鹽條件下結(jié)合DNA，可在低鹽條件下與DNA分離。用于清潔目的的含DNA溶液中的引物，單核苷酸，酶，礦物油，鹽離子等被分離，因?yàn)樗鼈兣cDNA沒有相似的性質(zhì)。

　　實(shí)驗(yàn)材料：PCR產(chǎn)物，試劑，試劑盒，PCR清潔套件，儀器，消耗品，96孔DNA制備板96孔深孔板96孔V形板

　　一、PCR八聯(lián)管廠家談試劑盒的組成，儲(chǔ)存，穩(wěn)定性

　　1、說(shuō)明書，消耗品：96孔DNA制備板，96孔1.6ml深孔板，96孔V形板。

　　2、緩沖液PCR-A：DNA結(jié)合溶液。在室溫下以密封狀態(tài)儲(chǔ)存。如果發(fā)生沉淀，應(yīng)將其溶解在65°C的溫浴中，并在使用前冷卻至室溫。

　　3、緩沖液W2濃縮液：除去鹽溶液。使用前，根據(jù)瓶子上的體積加入乙醇，充分混合，并在室溫下保存?？梢允褂?00%乙醇或95%無(wú)水乙醇。

　　4.洗脫液：2.5mM Tris-HCl，pH 8.5，在室溫下以密封狀態(tài)儲(chǔ)存。

　　二、PCR八聯(lián)管操作步驟

　　用戶可以選擇負(fù)壓或離心。

　　A.負(fù)壓法

　　1、正確連接負(fù)壓裝置，將96孔DNA制備板放在負(fù)壓裝置上;在PCR，酶消化，酶標(biāo)記或測(cè)序反應(yīng)溶液中加入3倍緩沖液PCR-A(如果緩沖液PCR-A小于100μl，加入100μl);充分混合并轉(zhuǎn)移至96孔DNA制備板，打開并調(diào)節(jié)負(fù)壓至-25-30英寸汞柱，并緩慢吸出板中的溶液。

　　2、加入0.3 ml緩沖液W2并吸收溶液。用相同的方法用0.3ml緩沖液W2洗滌兩次。

　　確認(rèn)在試劑瓶上的體積的緩沖液W2濃縮物中加入無(wú)水乙醇。

　　3、維持負(fù)壓并提取96孔DNA制備板10分鐘。

　　4、在長(zhǎng)纖維組織上將96孔DNA制備板粉碎6次，引流管朝下。

　　5、將96孔DNA制備板置于96孔V形板上，加入25-30ul水或洗脫至膜中心，在室溫下靜置1分鐘。通過(guò)以3 000×g離心5分鐘洗脫DNA。

　　B.離心

　　1、在PCR，消化，酶標(biāo)記或測(cè)序反應(yīng)中加入3倍體積的Buffer PCR-A(如果Buffer  PCR-A小于100μl，加100μl);混合并轉(zhuǎn)移到制備板96孔中的96孔DNA中。將DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，以1000×g離心1分鐘，棄去濾液。

　　2、在96孔DNA制備板中，加入0.3ml緩沖液W2，以1000×g離心1分鐘，棄去濾液。用0.3ml緩沖液W2以相同方式再次洗滌。確認(rèn)在試劑瓶上的體積的緩沖液W2濃縮物中加入無(wú)水乙醇。

　　3、將96孔DNA制備板置于96孔1.6ml深孔板中，并以3 000×g離心10分鐘。

　　4、將96孔DNA制備板置于干凈的96孔V形底板中，加入25-30ul水或洗脫至膜中心，在室溫下靜置1分鐘。通過(guò)以3  000×g離心5分鐘洗脫DNA。

　　PCR八聯(lián)管注意事項(xiàng)：

　　1、將洗脫液或水加熱至65°C有助于提高洗脫效率。

　　2、DNA分子是酸性的，建議儲(chǔ)存在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5洗脫液中。

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