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大鼠Elisa試劑盒實驗注意事項
ELISA檢測概述
ELISA(酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析)是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。
二、ELISA實驗注意事項
請在本試劑盒標(biāo)記的有效期內(nèi)使用。
試劑盒的試劑不能與其他批號的試劑或其他來源的試劑混合使用。
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
任何標(biāo)準(zhǔn)品稀釋、操作人員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、育溫度、試劑盒保存時間的改變,都將影響結(jié)合反應(yīng)。
本試劑盒在設(shè)計上去除或降低了生物學(xué)樣本中的一些內(nèi)源性干擾因素,并非所有可能的影響因素都已經(jīng)去除。
濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù) (n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(XnX5)。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
底物請避光保存。
嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
本試劑不同批號組分不得混用。
三、樣本的要求
1、標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20°C保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
3、以上是通用的樣本處理方法,無法涵蓋各種樣本,對于一些特殊樣本,建議實驗人員多參考已發(fā)表的文獻,自行設(shè)計合理的樣本處理方法。
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