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本生帶您了解、胎牛血清凍存和融化的注意事項

更新時間:2023-09-25    點(diǎn)擊次數(shù):3842

  本生帶您了解、胎牛血清凍存和融化的注意事項
 

  不同于其它常用的實驗方法,細(xì)胞培養(yǎng)是一個動態(tài)的過程。胎牛血清作為細(xì)胞培養(yǎng)一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長產(chǎn)生極大的影響。作為胎牛血清的主要供應(yīng)商之一,我們經(jīng)常收到焦急的客戶來電,稱血清出現(xiàn)了什么問題。小編將針對血清如何儲存、融化、為何出現(xiàn)沉淀以及如何減少沉淀做出詳細(xì)說明,旨在幫助客戶解決血清出現(xiàn)的問題。BUNSEN本生胎牛血清

  血清沉淀:

  1 血清非人工產(chǎn)品,沉淀出來系自然現(xiàn)象

  ● 纖維蛋白原(主要)

  ● 鹽析出。如磷酸鈣等

  ● 膽固醇和脂肪酸

  ● 蛋白析出

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  2 沉淀在下列情況下還會增加:

  ● 血清熱滅活

  ● 37℃培養(yǎng)(常常由此引發(fā)歧異)

  ● 反復(fù)凍融

  ● 溶解過程中沒有搖勻

  ● 伽馬射線照射

  ● 長期存放在2-8°C

  ● 血清加入到 RPMI1640 中時,沉淀往往會發(fā)生或增加

  ● pH升高時,沉淀會增加

  ● 在培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中,因為培養(yǎng)基的蒸發(fā)也會導(dǎo)致沉淀的增加

  3沉淀不會影響其對細(xì)胞的促生長作用

  ● 技術(shù)人員對此問題有過深入研究證明

  ● 請注意一個例外:沉淀影響巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)

  4 這種現(xiàn)象發(fā)生在所有的血清中

  ● l網(wǎng)站上說“G”品牌的胎牛血清沒有預(yù)老化,如果存放在2-8℃,血清中的各種蛋白或酯類有可能會凝聚析出,出現(xiàn)沉淀或混濁。這種不會影響血清對細(xì)胞的促生長作用。我們建議把血清存放在-20℃,并避免反復(fù)凍融。

  ● 品牌胎牛血清說明書中說:“在熔化過程中混濁多絮狀沉淀,這種現(xiàn)象對多數(shù)血清來說是正常的,并不影響其使用質(zhì)量。但它影響血清的外觀,影響瓶與瓶之間的一致性。BUNSEN本生胎牛血清

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  5 血清并沒有被污染

  ● 檢測血清是否被污染方法是將血清接種到血酯板上,培養(yǎng)后看是否有菌落形成.

  ● 在1000x顯微鏡下,有經(jīng)驗的微生物學(xué)家通過觀察有無格蘭仕染色的細(xì)菌,也可以判斷血清是否被污染

  如何去除血清中的沉淀?

  ● 如想去除這些絮狀沉淀物,可將血清分裝到無菌離心管中,以400g離心,上清液即可直接加入到培養(yǎng)液中。

  ● 不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物,因為可能阻塞濾膜。

  血清溶解建議-如何減少沉淀

  ● 將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱12-24小時左右使之浴解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

  ● 切勿將剛剛從-20℃冰箱里拿出來的血清直接放在水浴中,無論室溫的水或者37℃的水,因為在水浴中血清迅速熔化,很大的溫差(-20℃到37℃,溫差為57℃)極其容易造成血清產(chǎn)生沉淀。

  ● 直接放65℃水浴中更是極其殘忍的做法,是對血清的褻玩,對科學(xué)規(guī)則的粗暴踐踏!

  ● 血清應(yīng)該在-10℃以下保存。若一次無法用完一瓶,應(yīng)該無菌分裝,再冷凍保存。

  胎牛血清凍存的注意事項:

  1. 需要長期保存的血清有必要儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時刻切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因而,血清在凍入低溫冰箱前,有必要預(yù)留一定體積空間,不然易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

  2. 合規(guī)生產(chǎn)企業(yè)供給的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾器過濾血清。

  3. 瓶裝血清凍結(jié)需采用逐漸凍結(jié)法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝,在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡),使溫度與成分均一,削減沉積的發(fā)作。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃融化,溫差大的情況下血清容易形成蛋白質(zhì)凝聚而出現(xiàn)沉積和沉淀絮狀物。

  4. 熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已凍結(jié)的血清。加熱過程中須規(guī)矩?fù)u晃均勻。目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活,除非有必要,一般不建議做此熱處理,因為熱處理會形成血清沉積增多,而且還會影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:滑潤肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺、增強(qiáng)吞噬作用、促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)作化學(xué)趨化和活化。相關(guān)研究的使用者可以考慮血清增加熱滅活處理。

  5. 切勿將血清在37℃放置太久或者反復(fù)凍融,不然血清會變得污濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質(zhì)量。

  6. 血清融化后的沉淀主要是血清中的脂蛋白變性及凍結(jié)后血清中纖維蛋白形成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量??煞盅b至無菌離心管400g離心去除,也可不用處理直接加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

  7. 顯微鏡下小黑點(diǎn)是由于經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多,有些沉淀物在顯微鏡呈現(xiàn)為黑點(diǎn),常誤認(rèn)為血清受污染。

  胎牛血清本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。

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