小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽ELISA試劑盒說明書

　　一、產(chǎn)品概述

　　小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽(PINP)ELISA試劑盒是用于定量檢測小鼠血清、血漿或其他相關(guān)生物樣品中小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽濃度的體外診斷試劑。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理，具有高靈敏度、高特異性和操作簡便等特點(diǎn)，適用于科研實(shí)驗(yàn)、臨床診斷以及藥物研發(fā)等領(lǐng)域。

　　二、產(chǎn)品組成

　　1. 預(yù)包被PINP抗體的96孔板

　　2. PINP標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)

　　3. PINP檢測抗體

　　4. 辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗

　　5. 顯色液A(TMB)

　　6. 顯色液B(H?O?)

　　7. 終止液(2N H?SO?)

　　8. 濃縮洗滌液(20倍)

　　9. 樣本稀釋液

　　10. 酶標(biāo)儀用覆蓋膜

　　11. 試劑盒說明書

　　三、保存與運(yùn)輸

　　1. 試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃避光環(huán)境中，有效期為XX個(gè)月。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體、二抗和酶標(biāo)板切勿反復(fù)凍融。

　　3. 運(yùn)輸過程中應(yīng)保持試劑盒低溫狀態(tài)，避免陽光直射和劇烈震動(dòng)。

　　四、檢測原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測小鼠血清或血漿中的PINP。將PINP抗體包被于96孔板上，加入待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的PINP與包被抗體結(jié)合，再加入PINP檢測抗體，形成抗體-PINP-抗體復(fù)合物，最后加入HRP標(biāo)記的二抗，通過顯色反應(yīng)，利用酶標(biāo)儀測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測樣本中PINP的濃度。

　　五、操作步驟

　　1. 準(zhǔn)備工作：提前30分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。用蒸餾水或去離子水將洗滌液稀釋至工作濃度。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備：用樣本稀釋液將PINP標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　3. 加樣：分別將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和待測樣本加入孔板中，每孔100μL，設(shè)置空白對(duì)照孔，輕搖混勻。

　　4. 溫育：用封板膜封板后，置37℃溫育30分鐘。

　　5. 洗滌：揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外。

　　7. 溫育：再次用封板膜封板后，置37℃溫育30分鐘。

　　8. 洗滌：重復(fù)步驟5的洗滌操作。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色液A 50μL，再加入顯色液B 50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

　　10. 終止：每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

　　11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

　　六、結(jié)果計(jì)算與判斷

　　1. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值和對(duì)應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。

　　2. 將待測樣本的OD值代入回歸方程，計(jì)算出待測樣本中PINP的濃度。

　　3. 結(jié)果判斷：根據(jù)正常參考值范圍，判斷待測樣本中小鼠PINP的水平是否正常。

　　七、注意事項(xiàng)

　　1. 嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行，避免交叉污染。

　　2. 洗滌過程中要充分拍干孔板，避免殘留洗滌液影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　　3. 顯色反應(yīng)時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格控制，避免顯色時(shí)間過長或過短導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。

　　4. 若樣本濃度超出線性范圍，需適當(dāng)稀釋后重新測定。

　　5. 試劑盒為一次性使用產(chǎn)品，不可重復(fù)使用。

　　八、臨床意義

　　小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽(PINP)是骨形成過程中的重要標(biāo)志物之一，其濃度的變化可反映骨代謝的狀態(tài)。因此，通過檢測小鼠血清或血漿中的PINP濃度，可評(píng)估小鼠的骨代謝狀況，為骨質(zhì)疏松、骨折等疾病的診斷、治療和預(yù)防提供重要依據(jù)。

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