常規(guī)植物樣品總 RNA小量抽提1.植物樣品的研磨。

　　收集植物樣品并盡快浸泡到液氮中以防止RNA的降解。使用研缽、研磨棒和液氮將植物樣品研磨成盡量細(xì)小的粉末。RNA的產(chǎn)量取決于樣品類(lèi)型和研磨效果。

　　注:研磨后的植物粉末可直接保持于-70°c。

　　快速稱(chēng)取50-100mg 的研磨好的植物樣品至 1.5ml預(yù)冷的離心管中。

　　注:在加入裂解液之前，不要讓樣品解凍。初次使用時(shí)，推薦先使用 50mg，待取得理想結(jié)果后，

　　再酌情提高用量。

　　2.立即加入500ulBuffer RL/ B -ME 混合液至樣品中。立即于最高速度渦旋30-60秒充分打散樣品，室溫靜置3-5分鐘讓樣品充分裂解。

　　注:使用前分裝適量的 Buffer RL,每 1ml Buffer RL 加入20ulβ -疏基乙醇(B-ME)或2M DTT。若植物用量增加超過(guò)100mg，按比例增加 Buffer RL/2-ME的用量。

　　3.室溫下，14,000 xg離心5 分鐘。

　　4.把 gDNA過(guò)濾柱裝在2ml 收集管中。把第三步的上清液轉(zhuǎn)移至gDNA過(guò)濾柱中。14,000 xg 離心1分鐘。

　　5.棄去 gDNA 過(guò)濾柱。加入 o.5倍體積無(wú)水乙醇(~250ul)至濾液中。用移液槍吸打 3-5次混勻。

　　6.把 HiPure RNA Mini Column裝在 2ml 收集管中。轉(zhuǎn)移第5步的混合液至 RNA 柱子中。10,000 xg 離心30-6o秒。

　　7.(可選)這一步可插入DNase進(jìn)行膜上消化。(請(qǐng)另外訂購(gòu) DNase On Column Kit進(jìn)化膜上 DNase 消化)。

　　8.倒棄濾液，把柱子裝在收集管中。加入500ul Buffer RW1 至柱子中。10,000 xg

　　離心30-60秒。9.倒棄濾液，把柱子裝回收集管中。加入600ul Buffer RW2 (己用乙醇稀釋)至柱子中。10,000 ×g離心30-60秒。

　　注:在使用 Buffer RW2之前，必須按瓶子標(biāo)簽指示用無(wú)水乙醇進(jìn)行稀釋。

　　10.倒棄濾液，把柱子重新裝回收集管中。加入60oul Buffer RW2(己用乙醇稀釋)至柱子中。10,000×g離心30-60秒。

　　11.倒棄濾液，把柱子套回空的收集管。10,000× g 離心空柱⒉分鐘甩干柱子。12.將柱子轉(zhuǎn)移至新的 1.5ml離心管。加入 30-50ul DEPC 水至柱子的膜中央。靜置2分鐘。10,000 × g離心1分鐘。

　　13.(可選)再加入 30-50ul DEPC水至柱子的膜中央。靜置﹖分鐘。10,000 × g 離心1分鐘。

　　注: HiPure RNA Column最小的洗脫體積是 30ul,小于 3oul 會(huì)導(dǎo)致RNA 的洗脫效率下降。如果 RNA產(chǎn)量超過(guò)30ug,推薦按第13步進(jìn)行第二次洗脫。

　　14.棄去柱子，把 RNA保存于-80°c。